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Comment faire des gels de polyacrylamide

Bien que vous puissiez utiliser des gels de polyacrylamide pour la séparation de l'ADN, ils sont mieux adaptés pour la séparation des protéines et la caractérisation. Ils sont largement utilisés pour étudier poids moléculaire, la charge, la structure et la pureté des protéines. La mobilité électrophorétique de protéines permet de faire voyager à travers le réseau de polymères d'acrylamide lorsque le courant est appliqué. Les protéines se séparent en fonction de leur taille.

Choses que vous devez

  • Des plaques de verre
  • Peigne
  • Spacer
  • Pinces
  • Seringue
  • Gants de sécurité
  • Flacon de 150 ml
  • 26,6 ml de 29% d'acrylamide plus 1% de N, N-méthylènebisacrylamide
  • 52,7 ml d'eau
  • 20 ml de 5X Tris / BorateEDTA (TBE)
  • 0,7 ml de persulfate d'ammonium 10%
  • 35 microlitres de TEMED

Instructions

  1. Mettez des gants. Nettoyer et sécher le verre plaques, peigne et entretoises.




  2. Mettez la plaque plus grande sur une surface propre et sèche. Placez les entretoises sur les deux côtés et couvrir avec une plus petite plaque. Alignez soigneusement les plaques avec les entretoises sur deux côtés et le fond. Fixer les trois côtés des plaques pour sceller et les maintenir ensemble.

  3. Calculer la quantité de volume de gel nécessaire pour la taille des plaques et l'épaisseur des entretoises.

  4. Déterminer pour cent de solution de polyacrylamide nécessaire pour votre expérience. Pour 100 ml d'un gel de Polyacrylamide à 8%, mélanger 26,6 ml de 29% d'acrylamide plus 1% N, N-méthylènebisacrylamide, 52,7 ml d'eau, 20 ml de 5 X TBE et 0,7 mL de 10% de persulfate d'ammonium dans un petit flacon. Ajouter 35 microlitres de TEMED à la solution et mélanger délicatement. Travaillez rapidement après l'ajout de TEMED. Remplir une seringue avec la solution soigneusement et distribuer contenu dans l'espace vide entre les plaques jusqu'à ce que la solution soit légèrement plus petit en dessous de la plaque.



  5. Insérez délicatement le peigne et de formation entre les grandes et les petites plaques sur le dessus des plaques assemblées. Laissez le gel polymériser complètement pendant environ une heure.

  6. Retirez délicatement le peigne. Rincer les puits avec 1X TBE pour les nettoyer. Retirer les pinces et placer le gel dans l'appareil d'électrophorèse selon les instructions du fabricant. Le gel de polyacrylamide est prêt à utiliser pour votre expérience.

Conseils Avertissements

  • Nettoyer les plaques de verre à fond avant de couler le gel. Les taches d'huile ou sur le plaqué se traduira par des bulles d'air et d'entraver la migration de l'échantillon.
  • Parce que l'acrylamide est toxique, prendre plus grand soin lorsque vous travaillez avec elle. Toujours porter des gants lors de la manipulation acrylamide sous aucune forme. Utilisez une pipette automatique pour mesurer solution d'acrylamide et de mettre sur un masque lors de l'utilisation de la poudre de l'acrylamide.
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