Comment calculer la longueur de fragments d'ADN

Instructions

1. Obtenir une photographie d'un gel après électrophorèse sur gel. Les fragments d'ADN sont visibles sous forme de bandes dans les colonnes - connu sous le nom de voie.

2. Identifier la colonne qui contient la norme de l'ADN. Cette molécule d'ADN a été coupé avec une enzyme pour produire des fragments de taille connue - ou poids moléculaire. Il devrait y avoir une bande correspondant à chaque fragment.

3. Chaque fragment d'étiquetage de la norme de l'ADN avec la taille, mesurée en paires de bases. Cette information est fournie soit avec les blocs d'électrophorèse sur gel ou dans la littérature scientifique.

4. Mesurer la distance - en millimètres - parcourue par les fragments d'ADN standard. Mesurer à partir de l'avant du bien - lorsque l'échantillon a été placé sur le gel - à l'avant de la bande d'échantillon formé sur le gel.

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   Entrez les données dans une table.

Courbe standard

1. Procurez-vous un morceau de papier graphique semi-logarithmique sur lequel dessiner une courbe standard pour la norme de l'ADN. Papier semi-logarithmique comporte une échelle linéaire sur un axe et une échelle logarithmique sur l'autre axe. Cela vous permet de tracer le logarithme de la distance parcourue sans avoir à calculer.

2. Étiqueter l'axe des x avec la distance - en millimètres - parcourue par les fragments d'ADN. L'échelle de l'axe des x doit être linéaire.

3. Étiqueter l'axe Y avec la taille - en paires de bases - des fragments d'ADN. L'échelle de l'axe Y doit être logarithmique.

4. Tracer la distance parcourue et la taille des fragments d'ADN standard sur le graphique.

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   Connecter les points de la ligne de meilleur ajustement pour créer une courbe standard. Ceci est appelé une courbe standard, mais la ligne doit être droite.

Fragments d'ADN inconnu

1. Mesurer la distance - en millimètres - parcourue par les fragments d'ADN inconnus.

2. Localiser sur l'axe des x du graphique de la distance parcourue par les fragments inconnus.

3. Tracez une ligne verticale de ce point sur l'axe x de la courbe standard.

4. Tracez une ligne horizontale à partir du point d'intersection avec la courbe à l'axe-y. Ceci est la taille - en paires de bases - du fragment inconnu.