En partant du haut de l'image, mesurer la distance à chaque bande dans le "normes" voie de votre gel (aka l'échelle). La voie des normes contient des morceaux d'ADN dont la taille est déjà connu, de sorte que vous devriez déjà savoir la taille de chacun avant de commencer votre expérience. Aussi mesurer la distance parcourue par les bandes dans chacune des voies échantillons.
Diviser la distance de chaque norme et chaque bande dans les échantillons parcourus par la distance par rapport au fond du gel. Le résultat est appelé la mobilité relative. Vous pouvez utiliser le tableur pour faire le calcul pour vous si elle va faire cette étape rapide.
Entrez la mobilité relative et la taille de chaque norme dans votre tableur, puis utilisez l'outil graphique de votre tableur pour créer un graphique de ces données avec mobilité relative sur l'axe des x et la taille de l'y.
Monter une ligne au graphique en utilisant une régression non linéaire. Consultez la section Aide de votre tableur si vous avez besoin de savoir comment faire cela. Vous devriez vous retrouver avec une équation, peut-être semblable à ce qui suit:
y = (0,3) -2,5 x ^
Notez que x ici sera la mobilité relative, tandis que y est la taille. A noter également que votre équation peut avoir complètement différents chiffres pour l'exposant et le coefficient - cette équation est simplement fourni un exemple hypothétique.
Prenez la mobilité relative pour les bandes de votre échantillon et de le brancher que x pour calculer la taille des morceaux d'ADN dans les bandes de l'échantillon.
Supposons que l'équation dérivée par votre tableur était en effet y = (0,3) x ^ -2,5, et la mobilité relative d'une bande d'échantillon particulier était de 0,68. En substituant 0,68 dans votre équation, vous trouverez les éléments suivants:
y = (0,3) (0,68) ^ - 2,5
Utilisation de la calculatrice, vous soulevez 0,68 à -2.5 et de trouver ce qui suit:
y = (0,3) (2,62)
y = 0,786
qui aurait alors la taille estimée en kilobases de l'ADN dans l'un des groupes de l'échantillon.
Notez que vous pouvez ou ne pouvez pas besoin d'utiliser les instructions de cette section. Une électrophorèse sur gel d'agarose est souvent utilisé pour confirmer qu'un plasmide contient un insert donné. Si vous ne travaillez pas avec des plasmides, vous pouvez sauter cette section. Si vous êtes, cependant, vous pouvez suivre ces instructions.
Notez que si vous travaillez avec des plasmides non coupés ou entaillés, vous ne pouvez pas estimer la taille en utilisant la procédure de la section 1 ci-dessus. Voilà parce plasmides non coupés et entaillés migrent à des taux différents de l'ADN linéaire.
Comparez le nombre de bandes dans chaque voie. Rappelons qu'une enzyme de restriction coupe l'ADN au niveau de sites où une séquence donnée appelé le site de restriction est présente. Si un échantillon a été traité par deux enzymes de restriction, une bande de l'insert et une bande pour le reste du plasmide doivent tous deux être présents. En effet, l'insert sera flanqué de deux sites de restriction, chacun pour une enzyme différente, de sorte que les réductions à la fois de ces sites permettra de libérer l'insert du plasmide. Une coupe à un seul site, en revanche, permet de convertir le plasmide d'ADN linéaire. Un échantillon coupe avec aucun des enzymes de restriction ou d'une enzyme de restriction, alors, devrait figurer une seule bande, tandis qu'un échantillon coupé avec deux enzymes de restriction devraient figurer deux bandes.
Look out pour les bandes créées par l'ADN plasmidique entaillé. Un plasmide a entaillé une coupe dans un seul brin seulement, donc il migre plus lentement qu'un plasmide coupé. Plasmides coupés à son tour migrent plus lentement que l'ADN non coupée.
Estimer la taille de l'insert en utilisant la procédure décrite dans la section 1 et de déterminer si elle correspond à vos attentes (qui variera en fonction de l'expérience.)