Comme toujours lorsque l'on travaille dans un laboratoire, mettez vos lunettes, des gants et une blouse à manches longues pour assurer votre propre sécurité.
Presser la poire en caoutchouc pour le vider de l'air, puis placez-le au sommet de votre pipette graduée et laisser l'ampoule pour se détendre de sorte qu'il aspire l'eau vers le haut dans la pipette. Ensuite, retirer l'ampoule, et plafonner le haut de la pipette avec votre digitale cela va sceller la pipette de sorte que la solution à l'intérieur ne coule pas jusqu'à ce que votre doigt est retiré. Soulevez le bord de votre doigt légèrement pour laisser un peu de solution écouler hors de la pipette, jusqu'à ce que vous atteignez le volume désiré. Pratique avec un peu d'eau et un gobelet pour avoir une idée de la façon dont la pipette graduée fonctionne. Le lien dans la section Ressources a un clip de film pour vous montrer comment utiliser une pipette dans le cas où vous avez jamais travaillé avec un avant.
Tubes que les normes 1-5 Label 5 de test. Vous pouvez les étiqueter en utilisant du ruban adhésif et un stylo ou en utilisant un marqueur effaçable à sec.
Choisissez cinq concentrations pour vos normes. Vous voulez que les concentrations standard pour être séparés les uns des autres d'environ le même intervalle - par exemple, 0,1 M, 0,2 molaire, 0,3 molaire, etc. - et à peu près du même ordre que ce que vous attendez de votre inconnue sera. Pour l'instant, utilisez les cinq concentrations suivantes, mais rappelez-vous que vous aurez besoin de les modifier lors de l'exécution de votre propre expérience:
Norme 1: 0,1 molaire
Standard 2: 0,2 molaire
Norme 3: 0,3 molaire
Standard 4: 0,4 molaire
Norme 5: 0,5 molaire
Ensuite, prenez la solution standard 1 molaire et ajouter les montants suivants des tubes à essai 1-5. Rappelez-vous, ces montants sont calculés en utilisant les concentrations énumérées ci-dessus, de sorte que vous pouvez avoir besoin de les modifier au besoin lors de la réalisation de votre propre expérience.
Norme 1: 0,8 millilitres
Standard 2: 1,6 millilitres
Norme 3: 2,4 millilitres
Standard 4: 3,2 millilitres
Norme 5: 4 millilitres
Rincer la pipette graduée, puis de transférer les montants suivants d'eau déminéralisée:
Norme 1: 7,2 millilitres
Standard 2: 6,4 millilitres
Norme 3: 5,6 millilitres
Standard 4: 4,8 millilitres
Norme 5: 4,0 millilitres
Fondamentalement, l'idée est d'apporter la quantité de solution dans chaque tube jusqu'à 8 millilitres.
Cap chacun des tubes de normalisation avec parafilm et inverser les mélanger.
Marquer cinq tubes à essai comme "Inconnu 1-5." Ajouter les mêmes quantités de votre solution inconnue ou un test à chaque que vous avez utilisé avec la solution 1 molaire pour les normes. En d'autres termes, inconnu 1 contiendra 0,8 millilitres de solution d'essai et 7,2 millilitres d'eau, inconnu 2 contiendra 1,6 millilitres de solution d'essai et 6,4 millilitres d'eau, et ainsi de suite.
Cap chacune des inconnues avec parafilm, et soigneusement mélanger par inversion.
Tournez sur le spectrophotomètre et de lui permettre de se réchauffer. Le temps nécessaire dépendra du modèle et le fabricant.
Réglez la longueur d'onde sur le spectrophotomètre. La longueur d'onde dépend du type de produit chimique dans votre expérience. Pour l'instant, supposons que 500 nm, mais souvenez-vous que vous aurez besoin de changer cela pour différentes expériences.
Calibrer votre spectrophotomètre. La procédure d'étalonnage varie en fonction de l'appareil que vous utilisez. Pour le Spectronic 20, un modèle commun dans les laboratoires d'enseignement, vous allez d'abord régler la machine pour qu'elle indique «0 pour cent T" quand aucune cuvette est chargé, puis ajustez si on lit "100% T» quand une cuvette de blanc contenant déminéralisée l'eau seulement est chargé. Ces procédures peuvent varier selon le type de machine que vous utilisez, afin de consulter les instructions du fabricant pour plus de détails.
Après que la machine est calibrée, prendre le métro 1 de test standard et verser le contenu dans une cuve propre jusqu'à ce qu'ils atteignent la ligne de remplissage. Essuyer la cuvette avec un kimwipe pour enlever les traces de doigts ou autres saletés. Insérez la cuvette dans le spectrophotomètre et enregistrer le "% T" lecture.
Répétez cette procédure pour tous les 10 échantillons. Soyez certain de nettoyer la cuvette entre les échantillons pour vous assurer que vos résultats sont aussi précises que possible.
Prenez les résultats pour vos normes et les entrer dans un programme tableur / graphique comme Excel ou OpenOffice.
Utilisation du programme de feuille de calcul, divisez 100 pour cent par chacune des valeurs "% T" pour les normes, puis prendre le journal du résultat. Ce calcul vous donnera l'absorbance. Si vous saisissez la formule, votre tableur fera le calcul pour vous.
Exemple: Si le% T est de 50,6, la formule que vous entrez dans le programme de feuille de calcul serait le suivant:
log (100 / 50,6)
Le tableur sera faire le calcul.
Faites de même pour tous les cinq valeurs inconnues / expérimentales.
Représenter graphiquement les valeurs d'absorbance pour tous les cinq normes, avec concentration sur l'axe des x et l'absorbance sur l'axe des y. Utilisation du tableur, adapter une équation linéaire à ce graphique. L'équation sera de la forme y = mx + b. La plupart des programmes de feuilles de calcul ont une fonction de régression linéaire. Consultez le manuel de l'utilisateur pour votre tableur pour plus de détails sur la façon d'utiliser la fonction de régression linéaire.
Prenez l'équation de la droite de meilleur ajustement de votre programme de feuille de calcul et le résoudre pour y en soustrayant b des deux côtés et en divisant les deux côtés par m. Le résultat ressemblera à ce qui suit:
(y - b) / m = x
où b et m sont des valeurs trouvés par votre tableur.
Vérifiez vos valeurs d'absorbance pour les inconnues, et choisir trois qui tombent à propos dans la même gamme que les normes. Utilisez ces trois valeurs d'absorbance pour vos calculs restants. Si tous les cinq chute dans la même gamme que les normes, vous pouvez utiliser tous les cinq à la place, mais vous devez utiliser au moins trois.
Branchez chacune des trois valeurs d'absorbance dans votre équation en place de y. Rappelez-vous que votre équation était sous la forme suivante:
(y - b) / m = x
Ainsi, vous aurez envie de brancher la valeur d'absorbance pour chaque inconnue dans l'équation à la place de Y, puis de calculer x. Vous pouvez utiliser le tableur pour faire ce calcul pour vous et le rendre plus rapide. Vous avez maintenant calculé la concentration de la substance chimique d'intérêt à trois de vos inconnues dilué. La solution originale a été diluée à préparer ces inconnues, cependant, si vous avez besoin maintenant de travailler en arrière et calculer la concentration de la solution originale basée sur le facteur de dilution.
Chaque échantillon inconnu que vous avez inséré dans le spectrophotomètre a été dilué par une quantité différente. Par conséquent, vous devriez maintenant diviser la concentration que vous avez calculé sur la base de l'absorbance pour chaque lecture inconnu par le texte suivant:
Unknown 1: Diviser par 0,1
Inconnu 2: Diviser par 0,2
Inconnu 3: Diviser par 0,3
Inconnu 4: Diviser par 0,4
Inconnu 5: Divisez par 0,5
Rappelez-vous, cependant, que ces chiffres sont basés sur l'hypothèse que vous utilisez les dilutions décrites ci-dessus. Rappelez-vous de modifier ces valeurs si vous diluée vos échantillons par un montant différent.
Ajouter vos résultats ensemble, et les diviser par le nombre de résultats. Cela vous donnera une moyenne. Signaler ce numéro que votre conclusion pour la concentration de la solution d'origine.